药学论文_基于斑马鱼胚胎表型的Wnt/β-catenin
文章目录
1 材料与方法
1.1 实验动物
1.2 实验仪器与试剂
1.3 实验方法
1.3.1 激活剂BIO处理斑马鱼胚胎
1.3.2 抑制剂处理斑马鱼胚胎
1.3.3 抑制剂营救实验
1.3.4 整胚原位杂交
1.3.5 实验数据分析
2 实验结果
2.1 BIO激活斑马鱼原肠胚早期Wnt/β-catenin信号通路对胚胎眼部发育的影响
2.2 iCRT3和PNU-74654抑制斑马鱼原肠胚早期Wnt/β-catenin信号通路对胚胎心脏发育的影响
2.3 抑制剂XAV-939和PNU-74654对由BIO激活Wnt/β-catenin信号通路所造成的胚胎眼部发育异常的营救作用
3 结论
文章摘要:目的利用模式生物斑马鱼,建立1种基于胚胎表型的直观、快速的小分子抑制剂筛选方法,从而高效筛选和评价小分子化合物对体内Wnt/β-catenin信号通路的抑制活性。方法 Wnt/β-catenin信号通路激活剂6-bromoindirubin-3-oxime（BIO）处理受精后6 h斑马鱼胚胎,检测胚胎48 hpf眼睛发育情况;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理6 hpf斑马鱼胚胎,检测48 hpf胚胎心脏不对称发育情况;小分子化合物与BIO共同处理6 hpf斑马鱼胚胎,检测斑马鱼眼部表型营救情况。结果 Wnt/β-catenin信号通路激活剂BIO处理斑马鱼胚胎,48 hpf胚胎出现"无眼"表型;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂i CRT3、PNU-74654处理斑马鱼胚胎,48 hpf胚胎心脏左右不对称发育出现异常;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939、PNU-74654分别与BIO共同处理斑马鱼胚胎,48 hpf能够显著营救由BIO激活所导致斑马鱼的眼部缺失表型。已知Wnt/β-catenin信号通路异常激活与诸多癌症密切相关,实验为筛选具有靶向抑癌作用的先导化合物提供了高效、可靠、快速的筛选方法。
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