黄连素通过保护缺氧复氧诱导细胞损伤中的作用

目的探讨miR-29b在黄连素(berberine, Ber)保护缺氧/复氧(H/R)H9c2细胞损伤中的作用及其机制。方法将体外培养的H9c2细胞分为对照组(正常培养)、H/R组(行H/R处理)、H/R+Ber组(在H/R处理前给予150μmol/L黄连素处理)。采用MTT法检测细胞活力,LDH试剂盒检测细胞上清液中LDH释放量,流式细胞仪检测细胞凋亡,Caspase-3试剂盒检测细胞的Caspase-3活性,RT-PCR检测细胞中miR-29b的表达水平;构建miR-29b低表达的H9c2细胞株,采用上述方法观察黄连素和miR-29b低表达对H/R诱导的H9c2细胞损伤的影响。采用生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证miR-29b与PTEN的靶向关系,Western blot检测miR-29b对PTEN蛋白表达的影响。结果与对照组比较,H/R处理后细胞存活率和细胞中miR-29b的表达水平均明显降低,而细胞上清液中LDH释放量和、细胞凋亡率和Caspase-3活性均明显升高(P<0.05);与H/R组比较,黄连素处理后H/R引起的上述变化均明显受到抑制(P<0.05)。下调miR-29b表达显著减轻黄连素对H/R处理引起的H9c2细胞损伤的保护作用(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实PTEN是miR-29b的靶基因,Western blot实验证实miR-29b可负向调控PTEN蛋白的表达。结论 miR-29b在黄连素保护H/R诱导的H9c2细胞损伤过程中发挥积极作用,其作用机制可能与靶向调控PTEN表达有关。

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